• <td id="ya4aw"><option id="ya4aw"></option></td>
    <td id="ya4aw"><noscript id="ya4aw"></noscript></td>
    <noscript id="ya4aw"></noscript>
  • 固體樣本處理方法

    發布日期:2024-01-10 17:28:37   瀏覽量 :8
    發布日期:2024-01-10 17:28:37  
    8

     固體樣本處理原則:稱取1g的固體樣本,用9g的合適緩沖液溶解,分泌蛋白可以直接離心取上清檢測,細胞內的蛋白,要先收集細胞,再用合適方法破碎,離心取上清測試。

    1、組織標本:切割標本后,稱取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。對于植物組織,不好勻漿的話,就用液氮研磨,將植物組織放在研缽中,加入適量液氮,充分研磨。
    2、細胞內蛋白樣本:
    許多待測蛋白不是分泌蛋白,而是存在于細胞內的蛋白,這個時候,要先收集細胞,洗滌干凈,再破碎細胞,離心取上清。
    (1)培養的細胞
    A、動物細胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液,使細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融(如果反復凍融,破碎效果不好,就采用超聲波破碎),以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
    B、植物細胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液,使細胞濃度達到100萬/ml左右,置于冰盒上,用超聲破碎儀,設置破碎2s,冷卻30s的方式,充分破碎細胞,以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
    (2)組織的細胞
    切割標本后,稱取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),去除上清,再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗滌沉淀的細胞三遍。再用上述的細胞破碎方法破碎細胞。
    3、土壤:稱取1g土壤,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工將標本充分混勻。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。如果是測分泌蛋白,直接取上清檢測,測試細胞內蛋白,要破碎細胞。
    4、咽拭子:加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS,溶解咽拭子頭部,搖勻,用鑷子取出咽拭子并擠干液體,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。如果是測分泌蛋白,直接取上清檢測,測試細胞內蛋白,要破碎細胞。
    5. 植物標本的采集及保存
    1、 稱取0.1g(誤差±3%以內)新鮮植物組織樣本,在液氮中充分研磨;
    2、 加入1ml的提取液(80%甲醇), 置于-20度過夜;
    3、 于4度,8000rpm,離心1小時,取上清;
    4、 上清液過C-18固相萃取柱。具體步驟是: 80%甲醇(1ml)平衡柱→上樣→收集樣品→移開樣品后用100%甲醇(5ml)洗柱→100%乙醚(5ml)洗柱→100%甲醇(5ml)洗柱→循環。過柱后的樣本真空干燥或氮氣吹干,保存備用;
    5、 上樣前加入pH7.4 PBS緩沖液(1ml定容)?;靹蚝笫覝胤胖?0分鐘,然后4度離心(8000rpm,15分鐘),取上清并暫時保存于4度待用。

    *以上內容來自網絡

    公司 浙江聯碩生物科技有限公司
    關注公眾號
    客服小徐
    免責聲明:本站部分資訊、圖片來源于網絡及網友投稿,如有侵權請及時聯系客服,我們將盡快處理。
    版權所有:浙江聯碩生物科技有限公司
    技術支持 反饋 統計
    国产情侣一区二区_色8激情欧美成人久久综合电影_国产高清在线精品一区app_四虎国产精品永久地址49
  • <td id="ya4aw"><option id="ya4aw"></option></td>
    <td id="ya4aw"><noscript id="ya4aw"></noscript></td>
    <noscript id="ya4aw"></noscript>