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  • 超濾離心管具體用法

    發布日期:2021-06-29 18:08:17   瀏覽量 :1550
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    超濾離心管是一種采用優化過濾結構的設計方式,減少濃差極化,降低了膜易污染堵塞機率,加快了離心速度,縮短了離心所需的時間;超濾離心管還可用的膜表面面積提供快速樣品處理。


    超濾離心管具體用法:


    (1)選擇合適的超濾管。通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3,認真閱讀使用說明書,注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同。


    (2)新買來的超濾是干燥的,使用前加入超純水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鐘。然后將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為準。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。


    (3)平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機預冷至4度)。不同離心機的轉速 rpm換算成g之后,有所不同。離心機的加速度調至最低檔,減小對膜的壓力。注意,一定要等離心機達到目的轉速之后,方可離開離心機,否則離心機出問題時,無法第一時間處理。膜與轉軸的方向根據說明書調整(角轉離心機的情況是膜與軸垂直)。在實際使用中,一般轉速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。


    (4)當濃縮到剩下1ml時,取50ul緩沖溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mgml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測,繼續加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉淀,導致堵管。若發生沉淀,要確定沉淀的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,后者的方法是換不同的緩沖溶液,直到蛋白不發生沉淀為止。


    (5)前面幾步用以濃縮蛋白,如果要換Buffer,在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候,輕輕加入新的Buffer(經0.22um超濾膜超濾),再濃縮至1ml左右,連續三次,最后一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定,一般不多于500ul,也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,三次達到1000倍以上,基本上可以達到換buffer的目的。


    product code

    product name

    Packing specification

    LS-MCT-060-C

    0.6ml centrifuge tube. Sterilized

    1000pcs/bag

    LS-MCT-200-S

    2.0ml centrifuge tube. Sterilized

    500pcs/box

    LS-MCT-500-S

    5.0ml centrifuge tube. Sterilized

    300pcs/box

    LS-MCT-700-S

    7.0ml centrifuge tube. Sterilized

    200pcs/box

    LS-MCT-1000-S

    10ml centrifuge tube, with cap, bag, sterile

    100pcs/box

    LS-MCT-1500-S-T

    15ml centrifuge tube. Screw top. Round bottom. Sterilized

    25 pcs/bag

    LS-MCT-1500-S-C

    15ml centrifuge tube. Screw top. Sharp bottom. Sterilized

    25 pcs/bag

    LS-SCT-5000-S-C-SS

    50ml centrifuge tube, screw top, standable, sterile

    25 pcs/bag

    LS-SCT-5000-S-C

    50ml centrifuge tube, screw top, sharp bottom, sterile

    25 pcs/bag



    超濾
    蛋白
    離心管
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